基于HPLC-UVD-ELSD对酸枣仁中斯皮诺素及酸枣仁皂苷A的含量测定
更新时间：2025-10-20
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酸枣仁为鼠李科植物酸枣的干燥成熟种子，其核心功效为养心补肝、宁心安神、敛汗生津，临床常用于治疗心肝血虚所致的心悸失眠、虚烦多梦、自汗盗汗及津伤口渴等症；常与茯苓、知母等配伍增强安神之效，或与人参、黄芪合用改善气虚汗出。现代研究表明，酸枣仁在调理神经衰弱、更年期综合征等方面有一定的应用价值。
斯皮诺素是从酸枣仁中提取的黄酮碳苷类化合物，在部分鼠李科植物中也有分布，其独特结构赋予良好水溶性与生物活性，具有镇静安神、抗氧化、抗炎等功效，可改善睡眠，保护心脑系统；目前广泛应用于中药制剂、功能性食品及保健品领域。
酸枣仁皂苷A是从酸枣仁中提取的五环三萜皂苷类成分，结构复杂且具有特异性；具备显著的镇静催眠、抗焦虑作用，还能调节血脂、保护心肌。凭借这些药理活性，酸枣仁皂苷A成为中药安神方剂的关键物质，也在心血管疾病防治相关的医药研发与功能性产品开发中备受关注。
酸枣仁试样经浸泡、加热回流后，采用梯度洗脱条件，使用十八烷基硅烷键合硅胶色谱柱，紫外-可见光检测器串联蒸发光散射检测器检测，斯皮诺素检测波长为335 nm，酸枣仁皂苷A采用蒸发光散射检测器检测，分别用外标法与外标两点对数方程计算酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量。
悟空K2025高效液相色谱仪：K2025P2二元高压输液泵、K2025AS自动进样器、K2025CO柱温箱、K2025UVD 紫外-可见光检测器、K2025ELSD 蒸发光散射检测器、Wookinglab色谱工作站；
色谱柱：C18，4.6×250 mm，5 µm或者相当的色谱柱；
流动相：以乙腈为流动相A，水为流动相B，按下表进行梯度洗脱：
注：为了系统在进样前达到平衡，每次进样前运行10min。
进样量：酸枣仁皂苷A对照品溶液5 μL、15 μL，供试品溶液及斯皮诺素系列标准工作液10 μL；
洗针液：90 %甲醇水溶液；
柱温：25℃；
检测器及参数：紫外-可见光检测器，检测波长为335 nm；蒸发光散射检测器，蒸发温度为80℃，气体流量为3.0 L/min。
重复性测试
按照色谱条件进行采集，将斯皮诺素标准溶液（浓度为50 μg/mL）进样10 μL，色谱图如图1所示，积分结果如表1所示。
由表1中数据可知，斯皮诺素峰的理论塔板数为48818，拖尾因子为1.21，具有良好的峰形。
将斯皮诺素标准溶液连续进样7针，叠加的色谱图如图2所示，结果见表2。
由表2中数据可知，斯皮诺素标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.09 %，峰面积的RSD为0.40 %，具有良好的定性定量重复性。
按照色谱条件，将斯皮诺素系列标准工作液上机测定，斯皮诺素在5.0 μg/mL~200.0 μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.999。斯皮诺素系列标准工作液叠加的色谱图如图3所示。
酸枣仁皂苷A对照品溶液色谱图
按照色谱条件进行采集，将酸枣仁皂苷A对照品溶液进样15 μL，色谱图如图4所示，积分结果如表3所示。
由表3中数据可知，酸枣仁皂苷A峰的理论塔板数为503314，拖尾因子为1.08，具有良好的峰形。
外标两点对数方程
精密吸取酸枣仁皂苷A对照品溶液5 μL、15 μL与供试品溶液10 μL，依次注入液相色谱仪中测定。不同进样量酸枣仁皂苷A对照品溶液的色谱图如图5所示。
本实验以乙腈和水为流动相，使用梯度洗脱条件，将紫外-可见光检测器串联蒸发光散射检测器，对斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的理论塔板数、重复性以及酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量进行测定，实验结果表明：
斯皮诺素测定项目中，斯皮诺素峰的理论塔板数为48818，拖尾因子为1.21，具有良好的峰形；斯皮诺素标准溶液连续进样7针，保留时间的RSD为0.09 %，峰面积的RSD为0.40 %，具有良好的定性定量重复性；斯皮诺素在5.0 μg/mL~200.0 μg/mL浓度范围内呈现良好的线性关系，确定系数R2＞0.999。
酸枣仁皂苷A测定项目中，酸枣仁皂苷A峰的理论塔板数为503314，拖尾因子为1.08，具有良好的峰形。
因此，悟空 K2025高效液相色谱仪配置紫外-可见光检测器串联蒸发光散射检测器，可同时对酸枣仁中斯皮诺素和酸枣仁皂苷A的含量进行测定。
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